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Taq DNA連接酶是一種耐高溫連接酶，它能催化與同一互補靶DNA鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的5'-磷酸和3'-羥基之間形成磷酸二酯鍵。該催化反應只有當兩條寡核苷酸鏈與互補靶DNA完全配對，且兩條寡核苷酸鏈之間沒有間隙的條件下才會發生。因此，可以用它來檢測單堿基替換。Taq DNA連接酶以NAD⁺為輔助因子，在37-75°C范圍內均有活性。

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